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標(biāo)準(zhǔn)集團(tuán)解析高效液相色譜柱的正確使用
上海泛標(biāo)紡織品檢測技術(shù)有限公司是標(biāo)準(zhǔn)集團(tuán)（香港）有限公司內(nèi)地分公司，主要負(fù)責(zé)內(nèi)地銷售業(yè)務(wù)，上海千實(shí)精密機(jī)電科技有限公司成立于2012年，是生產(chǎn)工廠，負(fù)責(zé)研發(fā)生產(chǎn)測試設(shè)備，專注于研發(fā)、設(shè)計(jì)及生產(chǎn)紡織測試儀器，為學(xué)術(shù)研究單位及檢測機(jī)構(gòu)提供紡織測試儀器和服務(wù)，上海千實(shí)是目前國內(nèi)較有競爭力和研發(fā)實(shí)力的紡織檢測儀器廠家之一，研發(fā)團(tuán)隊(duì)由一群經(jīng)驗(yàn)豐富的工程師組成，我們本著全心全意為客戶服務(wù)，努力推動(dòng)紡織檢測儀器技術(shù)革新而努力。
色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。關(guān)于色譜柱的安裝、維護(hù)、保存以及由色譜柱導(dǎo)致的這樣那樣的色譜故障也是一門學(xué)問。高效液相色譜柱的正確使用包含：加裝保護(hù)柱，過濾流動(dòng)相和樣品，凈化樣品，避免過高的柱壓，注意溫度和酸堿度，正確及時(shí)的沖洗等。
1.加裝保護(hù)柱
保護(hù)柱的作用是過濾掉來自流動(dòng)相和樣品的化學(xué)“拉圾”同時(shí)也可以有效除去流動(dòng)相和樣品中的不溶物。盡管現(xiàn)在的色譜儀在流動(dòng)相吸入口、進(jìn)樣閥后部以及在色譜柱的兩端都裝有1、2μm等不同孔徑的濾器,但濾器只能除去不溶性顆粒而不能除去化學(xué)污染,因此,加裝保護(hù)柱是必要的,特別是在分析中藥、中成藥等復(fù)雜混合物和生物樣品時(shí)更是保護(hù)分析柱必不可少的措施。
保護(hù)柱填料應(yīng)與分析柱一致,粒徑可較分析柱大。保護(hù)柱屬消耗品,經(jīng)過一定次數(shù)的樣品分析(5～1次)后,出現(xiàn)柱壓顯著升高或峰形變壞或基線漂移時(shí),應(yīng)考慮更換保護(hù)柱。
2.過濾流動(dòng)相和樣品
流動(dòng)相通常由水或緩沖溶液與有機(jī)溶劑混合而成,原則上,所有經(jīng)過色譜柱的流動(dòng)相均應(yīng)過濾,但在實(shí)際操作上應(yīng)視具體情況而有所區(qū)別:當(dāng)有機(jī)溶劑用色譜純級,水用石英亞沸水或其它超純水時(shí),在能確保水和有機(jī)溶劑的質(zhì)量且沒有受到污染時(shí),過濾并無更多實(shí)際意義。
當(dāng)流動(dòng)相中含有緩沖鹽時(shí),則過濾是必要的,如前所述,當(dāng)緩沖溶液放置一段時(shí)間(視環(huán)境溫度不同而異,夏季一般不超過48h,冬季一般不超過一周)后,在使用前還應(yīng)重新過濾。
所配制的樣品試液在注入流路系統(tǒng)前均要經(jīng).45μm(.22μm則更好)孔徑濾膜過濾。要注意區(qū)分水系和油系,二者不可混用,以防止濾膜溶解而造成污染。
裝流動(dòng)相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線濾器要定期清洗和更換,以避免濾器因過載而起不到過濾作用。
3.凈化樣品
當(dāng)樣品中含有對色譜柱有損害的化學(xué)成分,如產(chǎn)生性吸附的蛋白質(zhì)、糖等有機(jī)分子和強(qiáng)吸附性物質(zhì),以及可能對柱填料產(chǎn)生破壞作用的基團(tuán)離子。在進(jìn)樣前應(yīng)盡可能對樣品進(jìn)行分離提純以除去多余雜質(zhì)組分。
4.避免過高柱壓
雖然高效液相色譜柱能耐受的壓力可達(dá)6psi(磅/平方英寸),但過高及過大的壓力變化均會(huì)縮短色譜柱的壽命,避免的方法是
(1)柱壓過高時(shí),盡可能采用較小的流速,以不超過柱允許壓力的一半為宜。
(2)當(dāng)流速較大時(shí),應(yīng)采取流速梯度的辦法使流速分步到位。
(3)使用手動(dòng)進(jìn)樣閥時(shí),進(jìn)樣閥的切換要盡可能的快。否則超過2%的壓力沖擊會(huì)很快使柱報(bào)廢。當(dāng)使用多柱聯(lián)用時(shí),柱切換要避免在高壓下進(jìn)行。
5.注意溫度和酸堿度
一般以硅膠為基質(zhì)的色譜柱使用溫度不超過6℃,以低于4℃為宜,特別是在流動(dòng)相pH接近使用限度時(shí),更應(yīng)降低使用溫度。
溫度過高會(huì)加快鍵合相的水解和硅膠的溶解,從而使填料性質(zhì)改變,柱床塌陷,降低柱效,改變峰形。
目前的鍵合硅膠色譜柱標(biāo)示的pH適用范圍可達(dá)2～1,但在實(shí)際使用時(shí)應(yīng)避免極端的pH條件,特別是在偏堿性的條件(pH≥8)下使用,如必須要在極端的pH條件下使用時(shí),可通過以下方法避免柱損害:
(1)在泵和進(jìn)樣閥之間加裝預(yù)柱(飽和柱)來飽和流動(dòng)相
(2)降低使用溫度
(3)檢驗(yàn)完畢后立即用與所使用的流動(dòng)相互相混溶的“溫和溶劑”徹底清洗。
6.正確及時(shí)的沖洗
開始試驗(yàn)前,應(yīng)了解柱中當(dāng)前是何種溶劑。對于新色譜柱,如無特殊說明均為評價(jià)報(bào)告中所用流動(dòng)相。柱中當(dāng)前溶劑一定要與分析樣品所用流動(dòng)相互溶,如不能混溶,要用與二者均能相互混溶的第三種溶劑過渡。
標(biāo)準(zhǔn)集團(tuán)（香港）有限公司作為一家集研發(fā)、制造、銷售、培訓(xùn)、服務(wù)于一體的現(xiàn)代技術(shù)企業(yè)，致力于將更多檢測儀器輸送市場，提供紡織類、皮革類、燃燒類、汽車內(nèi)外飾件、材料環(huán)境氣候老化等等材料物理性能檢測儀器，更可接受非標(biāo)定制，購買前均可按照客戶的要求進(jìn)行針對性試驗(yàn)，確保所購儀器適用。
